圓二色儀是一種用于研究生物大分子(如蛋白質(zhì)、核酸等)手性結(jié)構(gòu)特征的儀器,以下是其基本工作原理解析及優(yōu)點(diǎn)介紹:
1.偏振光的產(chǎn)生:先產(chǎn)生平面偏振光,然后通過特定的光學(xué)裝置將其轉(zhuǎn)化為左旋和右旋圓偏振光。這一過程涉及到光的電磁波特性,光是一種橫電磁波,其電場(chǎng)矢量與磁場(chǎng)矢量相互垂直,且與光波傳播方向垂直,一般將電場(chǎng)矢量作為光波的振動(dòng)矢量,光波電場(chǎng)矢量與傳播方向所組成的平面稱為光波的振動(dòng)面。
2.樣品對(duì)圓偏振光的吸收:當(dāng)左旋和右旋圓偏振光通過手性分子樣品時(shí),由于分子的手性特性,會(huì)對(duì)兩種圓偏振光產(chǎn)生不同的吸收。手性分子的結(jié)構(gòu)不對(duì)稱,導(dǎo)致其對(duì)左旋和右旋圓偏振光的相互作用不同,使得左旋圓偏振光和右旋圓偏振光在通過手性分子時(shí),被吸收的程度不同,進(jìn)而引起吸收峰的位移和強(qiáng)度發(fā)生變化。
3.信號(hào)檢測(cè)與處理:儀器檢測(cè)透過樣品后的左旋和右旋圓偏振光的強(qiáng)度差異,并將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。由于產(chǎn)生感光作用的主要是電場(chǎng)矢量,一般就將電場(chǎng)矢量作為光波的振動(dòng)矢量,通過對(duì)電信號(hào)的處理和分析,得到圓二色譜圖。圓二色譜圖中橫坐標(biāo)是平面偏振光的波長(zhǎng)λ,縱坐標(biāo)為吸收系數(shù)之差(Δε = εL -εR),摩爾橢圓度[θ]與Δε的關(guān)系為:[θ]=3300Δε,因此圓二色譜也可以以摩爾橢圓度為縱坐標(biāo),以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)作圖。
圓二色儀優(yōu)點(diǎn):
1.高靈敏度:能夠檢測(cè)到非常微小的手性分子對(duì)圓偏振光吸收的差異,從而可以準(zhǔn)確地分析樣品的手性結(jié)構(gòu)和構(gòu)象變化。這種高靈敏度使其能夠?qū)Φ蜐舛鹊臉悠愤M(jìn)行有效檢測(cè),對(duì)于研究稀有或難以獲取的生物大分子具有重要意義。
2.快速便捷:可以在較短的時(shí)間內(nèi)獲得樣品的圓二色譜圖,能夠快速反映樣品的手性結(jié)構(gòu)信息。相比其他一些需要復(fù)雜操作或長(zhǎng)時(shí)間測(cè)量的分析方法,圓二色儀具有明顯的時(shí)間優(yōu)勢(shì),能夠提高研究效率。
3.非破壞性:測(cè)量過程中不需要對(duì)樣品進(jìn)行特殊的處理或標(biāo)記,不會(huì)破壞樣品的結(jié)構(gòu)和活性,可以在接近生理狀態(tài)下對(duì)生物大分子進(jìn)行研究,更真實(shí)地反映其在自然環(huán)境中的狀態(tài)和性質(zhì)。
4.廣泛的應(yīng)用范圍:可應(yīng)用于有機(jī)立體化學(xué)、光學(xué)活性物質(zhì)純度測(cè)試、藥物定量分析、天然有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)與宏觀大分子、金屬絡(luò)合物化學(xué)、聚合物化學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域,為不同類型的手性化合物和材料的研究提供了有力的工具。